Extensa variedade de espécimes bacterianos pode ser isolada nas amostras biológicas, com vistas ao diagnóstico do agente etiológico de uma infecção. Uma das principais formas de se categorizar as bactérias, consiste na análise de suas características morfotinturiais (forma, arranjos/grupamentos das células e sua afinidade pelos corantes). Show
Uma das etapas mais importantes para o auxílio diagnóstico do patógeno causal de uma infecção, consiste na sua análise microscópica direta, através do material biológico obtido diretamente do local onde se pretende investigar (o mesmo material que será utilizado para a cultura). Para o exame bacteriológico direto, existem diversos métodos de coloração que podem ser utilizados no laboratório de microbiologia clínica (ex.: tinta nanquim, Ziehl-Neelsen, Albert-Laybourn), sendo a coloração de Gram, indiscutivelmente, a mais amplamente disponível e utilizada. Leia também: A Patologia Clínica/Medicina Laboratorial fazendo o futuro acontecer  É uma técnica de coloração secular, descrita em 1884 pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram, que consiste na preparação de um esfregaço em lâmina de vidro para microscopia, de preferência da porção mais purulenta/sanguinolenta da amostra. No caso de líquidos corporais, pode-se realizar uma citocentrifugação para se concentrar o material, obtendo assim uma melhor visualização das estruturas. A amostra é então mantida em ar ambiente para sua secagem e fixada por metanol ou por meio de um leve aquecimento. Um corante (cristal violeta) é adicionado, por um a dois minutos, e, em seguida, inserido o lugol, também por um a dois minutos. Dessa reação, forma-se o complexo iodo-pararrosalina na parede celular das bactérias, que coram-se de roxo (nessa fase, tanto as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas retêm o corante). Na próxima etapa, após a lavagem da lâmina, inicia-se a etapa de descoloração, acrescentando-se uma solução de álcool-éter ou de álcool-acetona ao material. Nesse momento, em virtude das diferenças entre a constituição das paredes celulares (as bactérias Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicanos e de ácidos teicóicos, já nas Gram-negativas essa camada é mais delgada, com maior proporção lipídica), as Gram-positivas resistem à descoloração, retendo o corante, permanecendo roxas. Em contrapartida, as finas e lipídicas paredes celulares das bactérias Gram-negativas, quando expostas ao álcool, fazem com que as mesmas percam o corante, tornando-se incolores. Na fase de contra-coloração, após uma lavagem da lâmina com água, é adicionado safranina (corante de cor vermelha), o qual é o responsável pela coloração avermelhada das bactérias Gram-negativas. Nova lavagem com água é realizada, secando-se cuidadosamente o material em seguida. A lâmina é então colocada no microscópio, sendo primeiramente visualizada em objetiva de pequeno aumento, para em seguida ser observada em objetiva de imersão em óleo (aumento de mil vezes). Mais do autor: Qual a importância da ordem correta na coleta de exames laboratoriais? Alguns exemplos de bactérias, suas características morfotinturiais e respectivas infecções mais relacionadas:
Limitações da técnicaDentre as limitações da coloração de Gram, podemos destacar:
ConclusãoApesar de ser uma técnica antiga, possuir algumas limitações e da disponibilidade de técnicas mais avançadas de identificação bacteriana, a coloração pelo Gram ainda é muito utilizada nos dias de hoje pelo setor de microbiologia. Sua grande vantagem consiste na sua rápida, fácil e barata execução, fornecendo assim valiosas informações no sentido de orientar o diagnóstico presuntivo, o início precoce e guiado do tratamento e a avaliação, pelo laboratório clínico, da qualidade da amostra coletada. Referências bibliográficas:
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Qual a diferença entre as paredes celulares de bactérias Gram é Gram?E as diferenças entre Gram positiva e Gram negativa? As Gram positivas possuem ácidos teicóicos e muitas camadas de peptideoglicano, enquanto as Gram negativas não possuem ácidos teicóicos, possuem uma ou poucas camadas de peptideoglicano, além de possuírem a camada de lipopolissacarídeo (LPS) e o periplasma.
Como funciona o método de coloração de Gram?Método. O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.
Qual a relação entre a estrutura da parede celular com a coloração de Gram?As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.
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Como a coloração de Gram funciona para diferenciar entre os dois tipos de parede?
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