Como é feita a preparação em um meio de cultura sólido?

Podemos ver uma árvore apodrecendo ou sentir o cheiro do leite azedando, mas podemos não compreender o que está ocorrendo a nível microscópico. Em ambos os casos, os microrganismos estão agindo. A árvore apodrece quando os microrganismos decompõe a madeira, o leite azeda devido à produção de ácido lático pelas bactérias. Assim, como todos os organismos, os microrganismos usam nutrientes para o crescimento e para todas as outras funções essenciais à vida.

Quando falamos em crescimento, estamos nos referindo ao número e não ao tamanho das células. Os microrganismos em crescimento estão, na verdade, aumentando seu número e se acumulando em colônias. Por meio do entendimento das condições necessárias, podemos estimular e controlar o crescimento dos que estamos interessados em analisar, como microrganismos patogênicos ou que contaminam água e degradam alimentos.

Aqui entram os meios de cultura que fornecem as condições ideais para que isso ocorra.

O que são Meios de Cultura?

Os meios de cultura são insumos preparados em laboratórios que fornecem os nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos (como bactérias, fungos e leveduras) fora do seu habitat natural. Existe uma variedade enorme destes meios e são utilizados para análises laboratoriais e estudos científicos em diversas áreas, principalmente em pesquisas de alimentos, água, cosméticos e microbiologia clínica.

Além dos nutrientes e condições ambientais favoráveis para esse cultivo, muitos critérios devem ser considerados. Diferentes microrganismos possuem diferentes necessidades, por isso o meio de cultura é adaptado para satisfazer essas necessidades, utilizando nutrientes específicos dependendo do microrganismo de interesse.

>> Leia também – Meios de Cultura: Como diferenciar meio enriquecido, seletivo e diferencial.

Cultivo de Microrganismos

Para entender como todo esse processo ocorre em um ambiente controlado, vamos verificar as ferramentas e etapas envolvidas:

• Meio de cultura – base que oferece nutrientes, favorecendo o crescimento de determinado microrganismo.

• Inóculo – quando os microrganismos de interesse são colocados em um meio de cultura para iniciar o crescimento.

• Cultura – quando microrganismos crescem e se multiplicam no meio.

• Placa de Petri – recipiente estéril, constituído por uma base e tampa, ideal para crescimento da amostra em condições controladas.

• Ágar – substância em gel colocada na placa de Petri que suporta e propicia o crescimento dos microrganismos.

O Ágar Bacteriológico é um ágar purificado no qual impurezas, pigmentos e sais foram removidos ou reduzidos ao mínimo. É um extrato hidrossolúvel extraído de algas vermelhas e pode ser utilizado como agente solidificante em meio de cultura bacteriológico ou para determinar motilidade e crescimento de anaeróbios e microaerófilos.

• Alças de Inoculação – utilizada para inocular a amostra, sem danificar o meio de cultura.

Primeiro é preparado o ágar (muitos deles já contém os nutrientes necessários para a cultura) que em seguida é despejado na placa de Petri, formando uma camada no fundo. Depois que a solução endurece, o microrganismo pode ser inoculado, geralmente através de uma alça de inoculação. Nesta etapa alguns cuidados devem ser tomados para que não haja nenhuma contaminação e só o microrganismo de interesse esteja presente. As placas de Petri devem ser incubadas e armazenadas em posição invertida de forma que o ágar fique para cima, assim a condensação não cairá sobre a amostra interrompendo a superfície de crescimento.

Confira o vídeo com o protocolo comumente utilizado para o crescimento dos microrganismos em laboratório, que compreende o desenvolvimento de uma colônia a partir de uma ou algumas células para posterior estudo ou análise.

Com informações do livro “Microbiologia” TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Artmed. 8ª edição.

Os meios de cultura são insumos preparados em laboratórios que fornecem os nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos (como bactérias e fungos) fora do seu habitat natural. Existe uma variedade enorme destes meios e são utilizados para análises laboratoriais e estudos científicos em diversas áreas, principalmente em alimentos, água, cosméticos e microbiologia clínica.

Além dos nutrientes e condições ambientais favoráveis para esse cultivo, muitos critérios devem ser considerados. Diferentes microrganismos possuem diferentes necessidades, por isso o meio de cultura é adaptado para satisfazer essas necessidades, utilizando nutrientes específicos dependendo do microrganismo de interesse. Além desses fatores, deve ser levado em conta o pH e a quantidade de oxigênio ou mesmo a sua ausência.

Como os microrganismos se desenvolvem em um Meio de Cultura?

Classificação dos meios de cultura

Os meios de cultura em microbiologia para o cultivo de bactérias são conhecidos como meios artificiais ou meios sintéticos, pois não ocorrem naturalmente, ou seja, eles são preparados no laboratório. Existem várias maneiras de se classificar os meios de cultura:

Quimicamente definido

Um meio quimicamente definido é aquele no qual todos os constituintes são conhecidos. Uma vez que é preparado no laboratório pela adição de determinada quantidade, em gramas, de cada um dos componentes (carboidratos, aminoácidos, sais).

Complexo

Um meio complexo é aquele no qual a exata constituição não é conhecida. Os meios complexos contêm extratos moídos ou digeridos de órgãos animais (corações, fígados, cérebros), peixes, leveduras, e vegetais. Fornecem os nutrientes, as vitaminas e os minerais necessários.

Sólido

Os meios sólidos são preparados adicionando-se ágar ao meio líquido e posterior colocação em tubos de ensaio ou placas de Petri, onde o meio se solidifica. As bactérias crescem na superfície do meio sólido.

O ágar é um polissacarídio complexo obtido de alga marinha vermelha. Ele é utilizado como agente solidificante, muito semelhante à maneira como a gelatina é utilizada como agente solidificante na culinária.

O Ágar Bacteriológico Kasvi, por exemplo, é um tipo de ágar purificado no qual impurezas, pigmentos e sais foram removidos ou reduzidos ao mínimo. Pode ser utilizado como agente gelificante em meio de cultura bacteriológico ou para determinar motilidade e crescimento de anaeróbios e microaerófilos.

Líquido

Os meios de cultura líquidos, sem agentes solidificantes, são também conhecidos como caldos e seu acondicionamento é feito em tubos de ensaio. São utilizados para ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas, dentre outros.

Enriquecido

Contém um grande suprimento de nutrientes que promove o crescimento dos microrganismos fastidiosos. É geralmente preparado pela adição de nutrientes extras a um meio denominado ágar nutriente.

O ágar-sangue (ágar nutriente mais 5% de eritrócitos de carneiro) e o ágar-chocolate (ágar nutriente adicionado de hemoglobina em pó) são exemplos de meios sólidos enriquecidos utilizados rotineiramente nos laboratórios de bacteriologia clínica.

Seletivo

Contém inibidores adicionados que tornam inviável o crescimento de certos microrganismos, sem inibir o crescimento do microrganismo que está sendo pesquisado. Por exemplo, o ágar MacConkey inibe o crescimento de bactérias gram-positivas, selecionando assim, as bactérias gram-negativas.

Diferencial

Permite a distinção dos microrganismos que crescem no referido meio. Por exemplo, o ágar MacConkey é frequentemente utilizado para diferenciar vários bacilos gram-negativos isolados de amostras de fezes. O ágar manitol salgado é utilizado para caracterizar o Staphylococcus aureus. O S. aureus não apenas cresce neste meio, mas também converte a cor do meio originalmente rosa em amarelo, em razão da sua capacidade de fermentar o manitol.

Os vários tipos de meios (enriquecido, seletivo, diferencial) não são mutuamente exclusivos. Por exemplo, como acabamos de ver, o ágar MacConkey é tanto seletivo como diferencial.

Inoculação de Meios de Cultura

Nos laboratórios de microbiologia clínica, os meios de cultura são rotineiramente inoculados com amostras clínicas (amostras que foram coletadas de pacientes com suspeita de doença infecciosa).

A inoculação de um meio líquido envolve a adição de uma parte da amostra ao meio. A inoculação de um meio sólido ou meio em placa envolve a utilização de uma alça de inoculação estéril para a aplicação de uma parte da amostra à superfície do meio. Esse processo é conhecido como semeadura em estrias.

Meios de cultura Kasvi

A Kasvi possui uma grande diversidade de produtos neste segmento com mais de 80 meios de cultura e suplementos.

Referências

• ENGELKIRK, Paul G., DUBEN-ENGELKIRK, Janet, BURTON, Gwendolyn W. Burton | Microbiologia para as Ciências da Saúde, 9ª edição. Guanabara Koogan, 2012.
• MADIGAN, Michael T., MARTINKO, John M., BENDER, Kelly S., BUCKLEY, Daniel H., STAHL, David A. Microbiologia de Brock, 14a edição. ArtMed. 2016

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