O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?

A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura.

O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.

Princípio da coloração de Gram

Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.

A coloração envolve 3 etapas principais:

  • Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo);
  • A descoloração (utilizando etanol / acetona);
  • A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).

Diferença entre bactéria Gram-positiva e Gram-negativa

A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos.

As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.

Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina  que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.

Exemplos de bactérias Gram-positivas

Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.

O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?
Gram-positiva

Exemplos de bactérias Gram-negativas

Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella.

O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?
Gram-negativa

Passo a passo da metodologia de Gram

  1.  Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos;
  2.  Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos;
  3.  Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
  4.  Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
  5.  Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
  6.  Lave em um filete de água corrente;
  7.  Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
  8.  Lave em um filete de água corrente;
  9.  Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo;
  10.  Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).

O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?
Método de coloração de Gram

Aplicação e benefícios da coloração de Gram

De fato a metodologia irá ajudar na identificação de uma infecção bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em cada caso.

Mesmo que nem todas as bactérias possam ser diferenciadas através da coloração de Gram, com certeza a metodologia tem grande aplicação no diagnóstico clínico e pesquisa biológica.

Produtos para a metodologia de coloração de Gram

Simulação

Por fim, neste site brainpop.com existe um jogo em que você conseguirá simular o passo-a-passo para a realização da coloração de Gram.

O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?

Referência

  • Ministério da Saúde. Técnica de Coloração de GRAM

O que explica a reação positiva das bactérias no método de coloração de Gram?

As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.

O que caracteriza a coloração das bactérias em Gram negativas e Gram

As bactérias Gram-negativas são classificadas pela cor que adquirem depois de submetidas a um processo químico denominado coloração de Gram. As bactérias Gram-negativas adquirem coloração vermelha quando se usa esse processo. As outras bactérias adquirem coloração azul. Elas são chamadas bactérias Gram-positivas.

Como ocorre o tingimento das bactérias pelo método Gram?

A coloração no método de Gram é dependente da ligação dos corantes às camadas de Peptideoglicano presentes na parede celular das bactérias. Essa camada de peptideoglicano consiste numa cadeia de dissacarídeos entrelaçada por pontes peptídicas, formando uma cobertura rígida para a bactéria.

Porque a coloração de Gram diferencia os grupos de bactérias em Gram

Bactérias Gram-positivas são aquelas cujas paredes celulares não perdem a cor azul-arroxeada quando submetidas a um processo de descoloração depois de terem sido coloridas pela violeta de genciana. As que assumem um tom róseo-avermelhado quando submetidas ao mesmo processo são ditas Gram-negativas.