Quanto mais concentrada for a solução maior será a sua absorbância?

Grátis

Índice Show

• Pré-visualização | Página 2 de 3
• Quanto maior a concentração maior a absorbância?
• Como calcular a concentração a partir da absorbância?
• Como medir a absorbância?
• Como funciona o espectro de absorção?

9 pág.

• Denunciar

Pré-visualização | Página 2 de 3

de onda que se deseja. 
 O aparelho então mede a absorbância em 
cada comprimento de onda dentro da faixa 
escolhida, gerando um gráfico, conhecido como 
espectro de absorção. 
 É possível preparar diferentes 
concentrações de um mesmo material que se 
deseja analisar e medir a absorbância de cada uma 
dessas soluções. 
 Dessa maneira, é possível identificar a 
absorbância no comprimento de onda máximo de 
absorção de cada uma dessas soluções, podendo 
ainda plotar uma curva de calibração que forneça 
qual a absorbância para cada uma das 
concentrações. 
 Isso possibilita descobrir, por exemplo, a 
concentração de uma solução desconhecida a 
partir da sua absorbância. 
 
 
PRINCÍPIOS DA ABSORÇÃO DE LUZ 
  1º Princípio 
Qual a relação da concentração com a interação da luz? 
5 
 
Gabriela Rodrigues 
 
 A absorção da luz é maior nas soluções com 
maiores concentrações. Então quanto mais 
concentrada for a solução menos luz irá atravessa-la. 
 Por que isso acontece? 
 Quanto mais concentrada a solução, maior é a 
quantidade da espécie do analito de interesse, então 
maior será a absorção. Assim, quanto mais 
concentração maior será a absorbância daquela 
solução. 
  2º Princípio 
 
 Quanto maior for o caminho óptico maior é 
absorção da luz, ou seja, quanto maior for a distância 
percorrida pelo feixe luminoso através da amostra 
maior é a absorção (mais quantidade de espécie do 
analito para absorver luz). 
 Existe um modelo matemático que descreva 
esse comportamento? 
  Lei de Lambert Beer 
 A absorbância de uma espécie em um 
determinado comprimento de onda é igual ao valor 
de absortividade molar (A) (quanto uma consegue 
absorver num determinado comprimento de onda) 
multiplicado pelo produto da concentração da 
amostra (c) e a distância percorrida pelo feixe (l). 
 
 Quando se analisa o que ocorre na cubeta, o que 
o equipamento analisa de imediato não é a 
absorbância e sim a transmitância (T), ou seja, o que 
passou pela cubeta sem ser absorvido. 
 
 
 
 
 Assim, a transmitância é dada pela radiação 
que passou pela amostra divida pela radiação 
incidente. 
 Em termos de porcentagem: 
 
 
 
 
 Essa transmitância depois é convertida pelo 
em absorbância. E como é feita essa conversão? 
 
 
 
 
 
 E por que não usar a transmitância ao invés 
da absorbância? 
 Quando se aplica a transmitância 
graficamente, o comportamento que se tem é: 
 
 
Absorbância 
( fixo) 
 
6 
 
Gabriela Rodrigues 
 Trabalhar com a absorbância graficamente é 
mais fácil. Uma vez que se faz uma linearidade, de 
modo que é possível trabalhar em termos de uma 
função de reta (Y = ax + b). 
 
APLICAÇÃO 
 Etapas de um processo espectrofotométrico 
 1ª ETAPA: PREPARAÇÃO 
 - Limpeza do material; 
 - Aferição das vidrarias; 
 - Calibração das balanças; 
 - Preparo de soluções (complexantes, 
tampões, solução estoque ou solução padrão); 
 - Preparo da amostra (abertura e solução). 
 
 2ª ETAPA: QUALITATIVA 
 - Montagem do espectro de absorção. 
 Pela equação de Beer, foi possível verificar 
que a absorbância é tida em termos de um 
comprimento de onda. Como saber qual é o 
comprimento de onda certo? 
 Diversos comprimentos de ondas são 
incididos na amostra, de forma que a mesma tem 
uma interação com eles. No entanto, existe um 
comprimento de onda que a amostra irá absorver 
mais, e é esse que se quer descobrir. 
 Qual é o comprimento de onda que o 
analito absorve mais? 
 Para responder tal questão, é preciso se leia 
uma solução com o analito de interesse e faça a 
leitura em diversos comprimentos de onda. De 
modo se vai se ter diversos valores de absorbância. 
Plota-se o gráfico: 
 
 O analito em questão tem uma absorção 
máxima em torno de 610 nm. Qual deve ser a cor 
dessa amostra? A amostra absorve laranja, a cor 
complementar é azul-esverdeado, desse modo, a 
amostra deve ter essa coloração. 
 Assim, 610 nm é o valor de comprimento de 
onda que vai se usar nas outras etapas. Sendo essa 
uma característica daquele analito. 
 
 3ª ETAPA: 
 - Montagem da curva de calibração e 
obtenção da equação da reta. 
 A curva de calibração é necessária para saber 
se o equipamento de fato responde de acordo com 
a lei de Lambert Beer, uma vez que essa lei tem um 
comportamento linear, o equipamento também 
precisa ter. 
 Para isso é necessário o preparo de soluções 
padrões do analito de interesse, conhecendo assim, 
a concentração dessas soluções. Faz-se então, uma 
solução branco (tudo menos o analito). Faz-se 
soluções de baixa concentração, aumentando-a 
gradativamente. 
 
7 
 
Gabriela Rodrigues 
 Sabendo o valor de absorção máximo do 
analito (610 nm). Agora pega-se as as amostras 
(em ordem crescente de concentração) e faz-se a 
leitura no equipamento em 610 nm, para saber o 
quanto esse analito absorve nesse valor. Fazendo 
as outras leituras, é possível plotar o gráfico (como 
o da figura). 
 Se o equipamento estiver “ok”, tem-se um 
comportamento linear, uma vez que quanto maior 
a concentração, maior a absorbância. Sendo 
possível então obter a equação da reta. 
Y = ax + b 
 
 
 A equação representada na equação da reta, 
nada mais é que a equação de Beer, uma vez que l 
(caminho) é considerado 1. 
 
 4ª ETAPA: ANÁLISE 
 - Análise da amostra. 
 Pega-se a amostra e faz-se a aleitura, tem-se 
um valor de absorbância. 
 O valor obtido é inserido na equação da reta 
obtida a partir do gráfico da curva de calibração, 
como sendo Y. Encontra-se X, acha-se a 
concentração da amostra de interesse. 
 Se houve diluição, é necessário ajustar os 
cálculos. 
EM RESUMO: 
 
 Fatores que afetam a linearidade de Beer 
1. Concentrações muito altas do analito em 
função das diversas interações 
eletrostáticas entre eles. 
2. Dispersão da luz em função da presença de 
sólidos na amostra. 
 
 
 
3. Fluorescência (tempo curto na absorção de 
luz e emissão de fótons) e fosforescência na 
amostra. 
4. Equilíbrios químicos pouco estabilizados. 
 
OBS: É importante observar se há cromóforos (partes 
da molécula responsáveis pela absorção) na amostra 
problema. 
 
 
 Análise da Cloroquina 
 O intuito aqui é saber se a concentração da 
amostra problema condiz com o padrão desejado. 
Para isso, basta fazer o espectro do padrão e da 
Absorbância 
 Absortividade 
molar () 
Concentração 
 
“Grau de erro” 
 
Sem presença 
de sólidos 
Com presença 
de sólidos 
Um feixe de luz é passado, sendo 
possível observar nanopartículas 
8 
 
Gabriela Rodrigues 
amostra e analisar os valores de absorbância 
obtidos. 
 Parte experimental 
 Pesou-se 0,1 g da amostra de cloroquina e 
transferiu-se para um balão volumétrico de 100 
mL. Adicionou-se 5 mL de água destilada para 
solubilizar. Em seguida o volume foi completado 
com ácido clorídrico 0,1% (p/v). 
 Fez-se a diluição em ácido clorídrico 0,1% 
(p/v) até alcançar uma concentração equivalente a 
0,001% (p/v). 
Para a dilução: M1V1 = M2V2 
M1 = 0,1% ; M2 = 0,001% ; V2 = 100 mL  V1 = 1 mL 
O volume necessário da solução amostra para produzir a 
solução diluída é de 1 mL 
 A solução padrão foi preparada com a mesma 
concentração, com o mesmo solvente. 
 Para fazer as medições no espectrofotômetro, 
utilizou-se um comprimento de onda igual a 343 
nm (especificado pela Farmacopeia). Utilizando 
para o branco ácido clorídrico 0,1% (p/v). 
 Primeiro faz-se então a leitura do branco, 
obtendo a linha de base do espectro. 
 Em seguida, faz-se a leitura da amostra 
padrão de concentração 0,01 % (p/v). 
 Faz-se a leitura da solução problema com 
mesma concentração do padrão. 
 Com os resultados realiza-se os cálculos 
necessários, de acordo com a lei de Beer, para 
determinação da concentração real, obtendo assim 
o teor da amostra do difosfato de cloroquina. 
OBS: lavar a cubeta 3x e enxugar bem. 
 Analisando

Página123

Quanto maior a concentração maior a absorbância?

Como calcular a concentração a partir da absorbância?

Como medir a absorbância?

Como funciona o espectro de absorção?