Qual é a finalidade da produção de meios de cultura no laboratório de microbiologia?

Meios de cultura são composições de substâncias que fornecem nutrientes necessários para o desenvolvimento de microrganismos. Sendo favorecido o crescimento, é possível a identificação desses organismos através das suas atividades bioquímica e metabólica.

Além dos nutrientes, existem condições ambientais para o crescimento microbiano, como temperatura, pH, umidade, presença ou não de oxigênio (condição aeróbia e anaeróbia), entre outros.

A classificação dos meios de Cultura

Os meios de cultura são classificados de acordo com seu estado físico, podendo ser sólido, quando possui agentes solidificastes como o ágar; semissólido, quando a consistência de ágar e/ou gelatina é intermediária, ou líquido, quando não possui solidificastes, caracterizando-se como caldo.

Devido à diversidade dos microrganismos, existem vários meios de cultura específicos que atendem às exigências para o desenvolvimento de cada um. Os meios básicos permitem o crescimento, porém não atendem a nenhuma condição nutricional específica de um determinado microrganismo. São exemplos de meio de cultura simples o caldo e o ágar simples.

A condição de meios especiais ou complexos

Já os meios especiais ou complexos possuem condições específicas que atendem às exigências de determinado microrganismo, pois contêm substâncias que propiciam a produção de enzimas e secreções específicas de determinados microrganismos, e que impedem o crescimento de outros que não são de interesse de análise.

Um exemplo de meio de cultura especial é o Manitol, um meio salino com indicador de pH que tem a sua cor alterada quando ocorre o processo de fermentação e produção de ácido. Nesse meio é possível a identificação da bactéria Staphylococcus aureus.

De acordo com o tipo de microrganismo a ser identificado, os meios de cultura possuem diferenciação química, podendo ter extratos vegetais (malte, tomate), animais (carne), microrganismos (levedura) e sintéticos.

Quais as classificações funcionais?

Ainda, é estabelecida uma classificação funcional para os diferentes meios de cultura, que podem ser para:

• Pré-enriquecimento: para amostras que sofreram algum processo físico ou químico (Ex.: caldo lactosado);
• Enriquecimento: desenvolvimento de bactérias gerais (Ex.: Caldo Tetrationato);
• Seletivo: inibem o crescimento de alguns microrganismos e propiciam o desenvolvimento de outros ( Ex.: Manitol e MacConkey);
• Diferencial: permite a diferenciação de microrganismos parecidos (Ex.: Ágar sangue e MacConkey);
• Triagem: avalia as atividades metabólicas, permitindo a identificação de vários microganismos. (Ex.: Tríplice açúcar e ferro);
• Identificação: para realização de provas bioquímicas e funções fisiológicas do organismo a ser identificado (Ex.: Ágar citrato, Caldo nitrato);
• Dosagem: determinações de aminoácidos, vitaminas e antibióticos;
• Contagem: determinação quantitativa da população microbiana (Ex.: Ágar de Contagem em Placas, Ágar Baird-Parker)
• Manutenção: conserva os microrganismos em laboratório (Ex.: Ágar Sabouraud).

Outros meios de cultura utilizados:

• Ágar MacConkey: favorece o crescimento de bactérias gram-negativas (enterobacterias e não fermentadoras).
• Ágar Manitol: favorece o crescimento de bactérias estafilococos, sendo muito utilizado para isolamento de Staphylococcus aureus.
• Ágar Thayer- Martin Chocolate: isolamento de Neisseria gonorrhoeae e N. meningitidis.
• Ágar Selenito: inibe coliformes e outras espécies da flora intestinal, como estreptococos; favorece crescimento da Salmonella spp e Shigella spp.
• Ágar Sangue: favorece o crescimento da maioria dos microrganismos, sendo utilizado para identificação presuntiva de Haemophilus spp
• Ágar Löwestein Jensen: isolamento primário das micobactérias.

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• BRQuality
• 07/11/2017

Os meios de cultura requerem cuidados para sua estocagem no laboratório após seu preparo, pois a função de cada um seus constituintes deve ser preservada, a fim de se garantir a obtenção de resultados confiáveis.Veja abaixo tudo sobre os laboratórios de microbiologia Estar sempre atento aos rótulos dos meios de cultura deve ser regra básica!  Consultar as quantidades a serem pesadas para o volume que será preparado, o modo de preparo (ferve? não ferve? autoclava? não autoclava?), o pH característico, são cuidados que não podem ser esquecidos jamais!

Assim como na operação dos equipamentos do laboratório, os manuais destes devem ser nossos constantes aliados, os rótulos dos meios de cultura, são nossas fiéis fontes de consulta e orientação!

Sobre como cuidar dos meios de cultura depois que os preparamos em nossos laboratórios, seguem algumas dicas importantes:

• A água utilizada para o preparo de meios de cultura deve ser sempre de boa qualidade: destilada, purificada ou deionizada!

• Para o preparo de meios de cultura que contém ágar: após pesagem dos pós, água destilada deve ser adicionada e, com bastão de vidro, deve-se proceder a homogeneização. Recomenda-se deixar a solução em repouso por cerca de dez minutos para garantir a hidratação do ágar, e então aquecer até fervura. O tempo indicado para aquecimento e fervura do meio de cultura varia de acordo com o tipo e marca comercial. Portanto, lembremos da regra de ouro: Atenção ao rótulo! A dica mais valiosa no preparo de meios de cultura que contém ágar, sem dúvida, é deixar o pó hidratando os 10 minutos antes do aquecimento! Observe aí no seu laboratório como o meio de cultura vai ficar mais homogêneo, solidificar mais rápido na placa e não vai dar grumos se você seguir esse “conselho”!

• Os meios de cultura, depois de preparados, podem ser estocados em geladeira (4-12°C) por até 3 meses, ou à temperatura ambiente (até 25°C) por até 30 dias. Alguns meios, como por exemplo o DRBC, contém substâncias fotossensíveis, e por isso precisam ser acondicionados em frascos âmbar ou estar envoltos papel alumínio para ficarem protegidos da luz.

• Meios de cultura distribuídos em placas (utilizados em técnicas pour plate): o plaqueamento destes meios deve ser feito dentro de capela de fluxo laminar. Claro que as placas de petri utilizadas devem ser previamente esterilizadas. Depois que o meio for adicionado à placa, é necessário que esta seja mantida entreaberta (com a tampa cobrindo somente sua metade), até que o meio solidifique, assim evita-se a formação de condensado e acúmulo de umidade. Quando o meio estiver sólido, as placas podem ser agrupadas e devem ser envoltas em filmes plásticos, ou acondicionas em sacos plásticos, e armazenadas em geladeira até o momento do uso. Recomenda-se utilizar estas placas em até uma semana.

• Meios que requerem suplementação: a adição de suplementos aos meios de cultura, quando requerida, deve ser feita com estes a temperaturas em torno de 47 +/- 2°C. Meios de cultura suplementados não devem ser reaquecidos, por isso, a suplementação deve acontecer no momento do plaqueamento.

• Fusão de ágar: Meios de cultura sólidos não devem ser fundidos mais de uma vez, pois o superaquecimento destes pode provocar alterações de pH e em seus constituintes. Uma boa “tática” é fracionar em frascos menores e utilizar parte do  preparado no mesmo dia, mantendo a quantidade a ser usada líquida (46-48°C, por até 4 horas), e o que sobrar, guardar, sob refrigeração ou à temperatura ambiente, conforme já mencionamos, refundido-o apenas mais uma vez, quando for necessário.

• Quando adicionar o meio de cultura às placas de petri, evite agitá-lo com vigor, pois as bolhas que se formar dificultam a leitura das colônias, e também podem interferir no desenvolvimento dos microrganismos.

Autor: Ana Carolina Castanheira – BRQuality Laboratório

A BRQuality é uma empresa focada em desenvolver soluções criativas junto aos seus clientes, oferecendo treinamentos e consultorias personalizados, desmistificando e descomplicando o que parece difícil, deixando as equipes preparadas para dar continuidade nos programas e entender sua interação na cadeia de alimentos de forma responsável.

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